cck8实验原理(cck8实验是用来干嘛的)

cck8实验原理是什么？

在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）存在的情况下，可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan)。活细胞越多，产生的Formazan就越多，颜色也会越深。

Cell Counting Kit简称CCK试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基－4-硝苯基）－3-(4-硝苯基）－5-(2,4-二磺基苯）－2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

研究方法

细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。其中EdU检测方法是最新的细胞增殖检测方法。

EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。

与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。

cck8实验步骤及注意事项

cck8实验步骤：

1、细胞种板：将对数生长期细胞用胰蛋白酶消化，配制成细胞悬液，每孔加入100μl，使每孔细胞密度1000-5000个，边缘孔用无菌PBS填充。5%CO2，37℃培养至细胞贴壁铺满孔底。

2、按实验方案加入药物。每种处理建议设置4-6个复孔。

3、处理结束后，每个孔中分别加入10μlCCK-8溶液，轻轻敲击培养板混匀，培养箱中孵育1-4小时。

4、使用酶标仪测定450nm光吸收值，按公式计算药物对细胞的抑制率。

注意事项

1、如果暂时不测定OD值，可向每孔中加入10μl0.1M的HCl溶液或者1%SDS（w/v）溶液，室温避光保存，在24h内测定，吸光值不会发生变化。

2、如果待测物质有氧化性或者还原性，可在加CCK-8之前除去旧培养液，并用培养基洗涤两次，然后加入新鲜培养基，以去除影响。

cck8实验步骤及注意事项

cck8实验步骤：

1、细胞种板：将对数生长期细胞用胰蛋白酶消化，配制成细胞悬液，每孔加入100μl，使每孔细胞密度1000-5000个，边缘孔用无菌PBS填充。5%CO2，37℃培养至细胞贴壁铺满孔底。

2、按实验方案加入药物。每种处理建议设置4-6个复孔。

3、处理结束后，每个孔中分别加入10μlCCK-8溶液，轻轻敲击培养板混匀，培养箱中孵育1-4小时。

4、使用酶标仪测定450nm光吸收值，按公式计算药物对细胞的抑制率。

注意事项

1、如果暂时不测定OD值，可向每孔中加入10μl0.1M的HCl溶液或者1%SDS（w/v）溶液，室温避光保存，在24h内测定，吸光值不会发生变化。

2、如果待测物质有氧化性或者还原性，可在加CCK-8之前除去旧培养液，并用培养基洗涤两次，然后加入新鲜培养基，以去除影响。

cck8实验的原理是什么？

在CCK-8试剂盒中，最主要的化学药品是WST-8，化学名为2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。

它的核心基团和MTT是一样的，是MTT的升级版本。在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）存在的情况下，可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。活细胞越多，产生的Formazan就越多，颜色也会越深。

所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢，因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低，有些细胞在药物处理后，可能活细胞数不变，但是代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少。

扩展资料：

CCK8的用途

1、细胞增殖测定：细胞增殖实验在很多领域都会用到，比如肿瘤相关、损伤后修复等。

2、药物筛选：在测定一个药物的毒性和安全有效浓度时，经常会用到CCK-8。

3、细胞毒性测定：这个可以和各个处理因素对细胞活性和增殖的影响，比如在UV、低氧或者什么化学物品对细胞的影响上。

cck8细胞相对活力计算公式

细胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]*100%抑制率=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]x100%

CCK-8(CellCountingKit-8)细胞活性和增殖检测医学研究中常用的实验技术，其原理是该试剂中含有WST-8，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪费硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazandye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

cck8实验原理(cck8实验是用来干嘛的)

cck8用的是动力学法还是终点法

终点法。

一、实验原理：

细胞活力检测试剂盒(CCK-8)可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。

其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】。

在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪_硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。

生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法,可替代传统的MTT法。

二、用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。

三、优点：使用方便，无需洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂。

CCK-8法能快速检测。CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度。CCK-8法的重复性优于MTT法，产生的formazan是水溶性的，减少因洗涤和溶解带来的误差。

CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取最佳测定时间，与MTT方法相比线性范围更宽，灵敏度更高。

CCK-8细胞活性检测试剂无需预制，即开即用。